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Infinite? F Nano+ 和Infinite F Plex多功能酶標儀進行HTRF ?檢測

2018/09/21

Infinite? F Nano+ 和Infinite F Plex多功能酶標儀進行HTRF ?檢測

應用指南

——酶標儀質控試劑盒,cAMP HiRANGE試劑盒,腫瘤壞死因子(TNF)-α試劑盒


摘要


本期應用指南總結了以多功能酶標儀Infinite 200 PRO為基礎,采用不同濾光片配置的Infinite F Nano+ 和 Infinite F Plex多功能酶標儀進行HTRF檢測(均相時間分辨熒光技術,Cisbio Bioassays公司)的實驗結果。
             
Infinite F Nano+多功能酶標儀   
         
                                                                        
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Infinite F Plex多功能酶標儀
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介紹

       HTRF(均相時間分辨熒光技術)結合了時間分辨熒光(TRF)和熒光共振能量轉移(FRET)兩種技術。HTRF是基于兩種不同熒光基團(供體與受體)間的熒光共振能量轉移,它利用長熒光壽命的Eu或Tb元素的穴狀化合物做能量供體(Donor),化學修飾的XL665或d2作為能量受體(Acceptor)。以HTRF技術為基礎的應用,由于其輕松的均相操作、穩健的實驗結果,以及高靈敏度和微量化等優點,越來越多地被廣泛用于各種分子間相互作用和結合實驗的研究。

      帝肯Infinite F Nano+ 和Infinite F Plex多功能酶標儀,配備有設計精巧獨特的無光纖光路,并包含一個分隔點在510nm的二向色鏡,可在UV區段提供最佳的激發波長,保證了優秀的HTRF實驗效果。


HTRF質控試劑盒


        HTRF質控試劑盒(RCK)主要用于對HTRF認證儀器的校準和檢測性能的驗證。HTRF質控試劑盒包含評估酶標儀HTRF檢測性能所需的全部分析試劑,并且適用于對比不同酶標儀之間HTRF性能的差別。


cAMP HiRange試劑盒


       cAMP(環磷酸腺苷:3’,5’-單磷酸環腺苷酸)是細胞內最重要的信使之一,它參與眾多生化過程,如G蛋白偶聯受體(GPCRs),蛋白激酶活化或離子通道調節。cAMP HiRange試劑盒采用以HTRF技術為基礎的競爭免疫分析法,直接定量檢測懸浮或貼壁細胞中cAMP含量。它可以在不同細胞株中檢測激動劑和拮抗劑對G蛋白偶聯受體的影響。最終,檢測的TR-FRET信號強度與樣品中cAMP的濃度成反比。


腫瘤壞死因子(TNF)-α試劑盒


       腫瘤壞死因子(TNF)-α是一種參與全身性炎癥反應的細胞因子,是眾多激發急性免疫反應的細胞因子中一員。在炎癥狀態下,被激活的巨噬細胞和單核細胞會分泌腫瘤壞死因子(TNF)-α。

      人腫瘤壞死因子(TNF)-α試劑盒中熒光標記的供體和受體通過抗體介導的識別,可與TNFα兩個不同表位結合,并定量檢測細胞或懸浮液中腫瘤壞死因子(TNF)-α的含量。HTRF信號比例與腫瘤壞死因子(TNF)-α含量呈正比線性相關。


實驗結果


HTRF酶標儀質控試劑盒


      本實驗結果包含在Infinite F Nano+和Infinite F Plex多功能酶標儀上使用HTRF質控試劑盒進行儀器性能驗證的各項HTRF檢測。

      這兩款不同配置的Infinite F200 PRO多功能酶標儀均符合Cisbio公司指明的性能參數標準(參見表1和表2),具有優異的檢測范圍(Delta F low = 32, Delta F high = 1189, Z‘ value = 0.95),以及極低的檢測變異系數(所有校準品和標準品的變異系數≤ 2%)。


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表1:HTRF 認證的性能標準


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表2:HTRF質控試劑盒檢測結果


cAMP HiRange試劑盒


下圖1顯示cAMP梯度稀釋的Delta F值與cAMP濃度成反比關系,形成了競爭分析中最典型的S型曲線。


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圖1:競爭性cAMP曲線


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表3:cAMP檢測結果



人腫瘤壞死因子(TNF)-α試劑盒


腫瘤壞死因子(TNF)-α的梯度稀釋標準曲線在濃度為2000 至20 pg/ml范圍內接近線性(R2= 0.9998)。


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圖2:腫瘤壞死因子(TNF)-α梯度稀釋曲線的線性表現

根據Cisbio公司提供的評估實驗方法,只有1-3校準品可以作為腫瘤壞死因子(TNF)-α檢測限計算的基礎。實驗結果顯示,腫瘤壞死因子(TNF)-α的檢測限為5.56 pg/ml。詳細的檢測結果參見下表4(三次獨立檢測結果的平均值)。



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表4:腫瘤壞死因子(TNF)-α檢測結果



結論


依照HTRF質控試劑盒的標準,配有510二向色鏡的Infinite F Nano+ 和 Infinite F Plex多功能酶標儀符合HTRF性能認證實驗的各項參數要求,因此被認定為HTRF認證儀器。同時,此兩臺設備均可以高靈敏且可靠檢地測定環腺苷酸(cAMP)和腫瘤壞死因子(TNF)-α含量??傊?,HTRF質控試劑盒、cAMP HiRange試劑盒和人腫瘤壞死因子(TNF)-α試劑盒都顯示配有510二向色鏡的Infinite F Nano+ 和 Infinite F Plex多功能酶標儀是適用于各類HTRF檢測項目的完美檢測儀器。



縮寫表


cAMP  環腺苷酸

CV       變異系數 

FRET    熒光共振能量轉移

TNF      腫瘤壞死因子 

TRF       時間分辨熒光

TR-FRET 時間分辨熒光共振能量轉移

HTRF     均相時間分辨熒光

RCK       酶標儀質控試劑盒

S:B ratio  信噪比 

SD        標準差


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